必备知识·自测诊断
1．图解识记微生物的培养、分离与计数
2．熟记微生物分离与计数的两个实例
(1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
①筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。
②测定微生物数量的常用方法：活菌计数法和显微镜直接计数。
③过程：土壤取样→制备培养基→样品稀释→涂布平板→培养与观察→菌落计数。
④鉴定方法：含酚红指示剂的以尿素为唯一氮源的培养基→细菌→指示剂变红，则该菌能分解尿素。
(2)分解纤维素的微生物的分离：
①实验原理：
即：可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
②流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌落。
(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质(√)
(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(×)
(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(√)
(4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(×)
(5)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落(√)
(6)对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法(×)
(7)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源(√)
(8)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低(×)
(9)刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌(×)
比较记忆果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作
1．判断有关果酒和果醋叙述的正误
(1)醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸(×)
(2)酵母菌是嗜温菌，所以果酒发酵所需的最适温度高于果醋发酵温度(×)
(3)在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长(√)
(4)在家庭中用新鲜葡萄制作果酒时，需给发酵装置适时排气(√)
(5)在制作果酒、果醋时，适当加大接种量可以提高发酵速率、抑制杂菌生长繁殖(√)
2．判断关于腐乳制作的叙述的正误
(1)制作腐乳的菌种只有毛霉(×)
(2)腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶(√)
(3)将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶口处需加大用盐量(×)
(4)在腐乳制作过程中加入香辛料既能调节风味，还具有防腐杀菌作用(√)
(5)在腐乳制作过程中，盐的用量要适宜，酒的含量一般控制在12%左右(√)
3．判断关于泡菜制作的叙述正误
(1)泡菜制作的菌种主要是醋酸菌(×)
(2)制作泡菜时，盐水煮沸后可以立即使用(×)
(3)泡菜坛的选择、发酵过程中坛沿要注满水都有利于泡菜的无氧发酵(√)
(4)泡菜的制作前期需要通入氧气，后期应严格保持无氧条件(×)
关键能力·课堂培优
综合运用能力 掌握微生物的培养和利用
[知识网络]
[题点练通]
1.(·全国卷Ⅰ)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5g/L)。
Ⅱ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(15g/L)。
Ⅲ号培养基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(45g/L)。
回答下列问题：
(1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是________________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是____________。
(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会__________，其原因是__________________________________________________。
(3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是________________。
(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供____________和____________。
解析：(1)Ⅰ号培养基中含有牛肉膏、蛋白胨和有机物X等，其中X仅含有C、H两种元素，故为微生物提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨。Ⅱ、Ⅲ号培养基中除无机盐外，还含有有机物X，故为微生物提供碳源的有机物是X。
(2)因Ⅱ号液体培养基中的有机碳源只有X，故培养一段时间后，不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖，故不能降解X的细菌比例会下降。
(3)对微生物分离的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，但其中只有稀释涂布平板法能够计数。
(4)能高效降解X的细菌能将X代谢为丙酮酸，丙酮酸在有氧条件下被降解时能释放出大量能量，故丙酮酸可为该细菌的生长提供能量。丙酮酸还可以为该细菌中其他物质的合成提供原料。
答案：(1)牛肉膏、蛋白胨 X (2)下降 不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖 (3)稀释涂布平板法 (4)能量 合成其他物质的原料
2．(·全国卷Ⅱ)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在～℃条件下加热1～2h。能耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。(2)巴氏消毒法是在70～75℃条件下煮30min或在80℃条件下煮15min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。(3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，从而杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。(4)自来水通常是用氯气进行消毒的。(5)在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是锅内原有的冷空气没有排尽。
答案：(1)可以 (2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少 (3)破坏DNA结构 消毒液 (4)氯气 (5)未将锅内冷空气排尽
3.(·全国卷Ⅱ)物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题：
(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是________。
(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明____________________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明________________________________________________________________________。
解析：(1)物质W是一种含氮有机物，要分离能够降解物质W的细菌，需用以物质W为唯一氮源的选择培养基进行筛选。
(2)由题图可知，甲菌落周围没有透明圈，说明甲菌不能降解物质W，乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解物质W，故要得到目标菌，应选择乙菌落进一步纯化。
(3)要鉴定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，则培养基中不能添加氮源，所以应将甲、乙菌分别接种在无氮源的培养基上(其他条件相同且适宜)，若细菌能生长，则说明细菌能利用空气中的氮气作为氮源。
(4)实验目的是比较天然酶和酶E降解物质W的能力，做实验时要设计空白对照，所以C处应滴加缓冲液。C处没有出现透明圈，说明缓冲液不能降解物质W，A、B处透明圈的出现说明物质W被降解，若两个透明圈直径大小相近，则说明酶E与天然酶降解物质W的能力相近。
答案：(1)W (2)乙 乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W (3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源 (4)①缓冲液 ②缓冲液不能降解W 酶E与天然酶降解W的能力相近
4．(·全国卷Ⅰ)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。
回答下列问题：
(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制________的生长，加入了链霉素的培养基属于________培养基。
(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有__________________(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有________________(答出两点即可)。
(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是________，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_______________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是、和，取平均值；
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、和，取平均值。
有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
解析：(1)链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在M培养基中加入链霉素作为选择培养基，可筛选出真菌。(2)培养基中的营养成分一般包括碳源、氮源、水和无机盐等。细胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白质、核酸等，故加入的氮源可参与以上物质的合成。(3)能产生淀粉酶的微生物可将淀粉水解成麦芽糖，淀粉遇碘液变蓝，向加有淀粉的培养基中加入碘液后培养基呈现蓝色，产淀粉酶的菌落周围的淀粉被水解，形成透明圈，可根据透明圈的大小判断产生淀粉酶的多少。(4)统计菌落数时，一般选择菌落数在30～的平板进行计数，甲同学统计的3个平板中的菌落数在正常范围内且差距不大，比较准确；乙同学统计的3个平板中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。
答案：(1)细菌 选择 (2)碳源、无机盐 蛋白质、核酸 (3)碘液 淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈 (4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差
理解能力 发酵工程在传统发酵食品中的应用
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[题点练通]
1.(·江苏高考)某高校采用右图所示的发酵罐进行葡萄酒主发酵过程的研究，下列叙述错误的是( )
A．夏季生产果酒时，常需对罐体进行降温处理
B．乙醇为挥发性物质，故发酵过程中空气的进气量不宜太大
C．正常发酵过程中罐内的压力不会低于大气压
D．可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
解析：选B 利用酵母菌进行酒精发酵时，一般将温度控制在18～25℃，因此夏季生产果酒时，需要对发酵罐体进行降温处理；发酵过程中，进气口阀门应该关闭，以保证发酵罐的无氧环境，使酵母菌进行无氧呼吸产生酒精；正常发酵过程中，由于酵母菌进行无氧呼吸产生CO2，所以发酵罐内的压力增大，高于大气压；葡萄酒的发酵过程消耗葡萄糖，所以可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵。
2．(·海南高考)葡萄酒是葡萄汁经酵母菌发酵而成的。酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示。
回答下列问题：
(1)试管中的X溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，用甲装置酿制葡萄酒的优点是________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________(答出两点即可)。
(2)葡萄汁装入甲装置时，要留有约1/3的空间，这种做法的目的是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________(答出两点即可)。
(3)某同学若用乙装置进行发酵，并设置两个不同处理组(乙A和乙B)，乙A装置中保留一定量的氧气，乙B装置中没有氧气。在其他条件相同且适宜的情况下，测得一段时间内乙A和乙B中酒精含量的变化趋势及乙A中氧气含量的变化趋势，如曲线图所示。
图中曲线①、②、③依次表示_______、_______、_______含量的变化趋势。
(4)从细胞呼吸类型看，酵母菌属于________生物；从同化作用的类型看，酵母菌属于________(填“自养”或“异养”)生物。
解析：(1)试管中的X溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，用甲装置酿制葡萄酒的优点是不需要开盖放气；避免了因开盖引起的杂菌污染。(2)葡萄汁装入甲装置时，要留有约1/3的空间，这种做法的目的是为酵母菌大量繁殖提供适量的氧气；防止发酵旺盛时汁液溢出。(3)分析题意可知，图中曲线①、②、③依次表示乙A中的氧气、乙B中的酒精、乙A中的酒精含量的变化趋势。(4)从细胞呼吸类型看，酵母菌属于兼性厌氧生物；从同化作用的类型看，酵母菌属于异养生物。
答案：(1)不需要开盖放气；避免了因开盖引起的杂菌污染 (2)为酵母菌大量繁殖提供适量的氧气；防止发酵旺盛时汁液溢出 (3)乙A中的氧气 乙B中的酒精 乙A中的酒精 (4)兼性厌氧 异养
3.(·西安期末)下图为腐乳制作过程的流程图，下列说法错误的是( )
A．毛霉为好氧型真菌，为避免缺氧，码放豆腐时要留出一定缝隙
B．加盐腌制的目的是析出豆腐中的水分使之变硬，同时能抑制微生物的生长
C．加卤汤、密封腌制中，毛霉不断增殖，并产生大量的酶，分解蛋白质
D．用胶条密封瓶口时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，以防止瓶口污染
解析：选C 毛霉是异养需氧型微生物，所以为避免缺氧，码放豆腐时要留出一定缝隙；加盐可以析出豆腐中的水分使之变硬，同时能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质；加卤汤、密封腌制，具有防腐杀菌的作用，同时使腐乳具有一定的香味，在此条件下毛霉不能生长增殖；用胶条密封瓶口时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，以防止瓶口污染。
4．利用卷心菜发酵制作泡菜过程中，乳酸菌、酵母菌细胞数量和pH的变化如图所示。下列叙述错误的是( )
A．酵母菌和乳酸菌均有核膜包被的细胞核
B．发酵初期乳酸菌建立了明显的菌种优势
C．前6dpH下降主要由乳酸菌代谢引起
D．发酵中期酵母菌通过无氧呼吸获取能量
解析：选A 乳酸菌是原核生物，细胞内没有核膜包围的细胞核；根据曲线图中乳酸菌和酵母菌的数量变化曲线对比分析可知，发酵初期乳酸菌远多于酵母菌，所以乳酸菌成为了明显的优势菌种；结合曲线图分析，前6d，由于乳酸菌远多于酵母菌，其产生的乳酸会降低培养液的pH；由于整个发酵过程都是在无氧环境条件下进行的，在发酵中期(22～26d)，酵母菌只能通过无氧呼吸获取能量。
5．(·凉山模拟)乳酸菌能产生亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解，某兴趣小组从泡菜滤液中筛选出亚硝酸盐还原酶活力较高的乳酸菌，进行了相关实验。请回答下列问题：
(1)为保证泡菜发酵过程中的无氧环境，在装坛发酵前后需要检查泡菜坛________________________________，并对泡菜坛进行________________________处理，在腌制过程中，坛中会出现溶液量增多现象，主要原因是________________________________。
(2)将筛选出的乳酸菌，用于泡菜制作过程，进行食盐用量与亚硝酸盐含量的探索实验，结果如图。
①泡菜制作过程中，pH呈下降趋势，原因是乳酸菌发酵在第________阶段产生________。
②据图可知，腌菜时食盐的浓度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现得越早，且峰值较高，原因是________________________________________。
③实验结果说明，食盐用量和______________影响亚硝酸盐含量，亚硝酸盐含量达到峰值后下降，一方面是因为________________环境抑制杂菌生长，使亚硝酸盐的产生量降低；另一方面是因为________________________。
解析：(1)为保证泡菜发酵过程中的无氧环境，在装坛发酵前后需要检查泡菜坛有无裂纹和砂眼，并对泡菜坛进行用水密封坛口处理，在腌制过程中，坛中会出现溶液量增多现象，主要原因是外界溶液浓度高使蔬菜细胞渗透失水。(2)①泡菜制作的原理是乳酸菌的无氧呼吸，无氧呼吸第二阶段产生了乳酸，导致pH呈下降趋势。②食盐用量过低，会造成细菌大量繁殖，因此图中腌菜时食盐的浓度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现得越早，且峰值较高。③据图分析可知，食盐用量和腌制时间都会影响亚硝酸盐含量，亚硝酸盐含量达到峰值后下降，是因为缺氧和酸性环境抑制杂菌生长，使亚硝酸盐的产生量降低，同时乳酸菌产生亚硝酸还原酶会将亚硝酸盐分解。
答案：(1)有无裂纹和砂眼 用水密封坛口 外界溶液浓度高使蔬菜细胞渗透失水 (2)①二 乳酸 ②食盐用量过低，造成细菌大量繁殖 ③腌制时间 缺氧和酸性 乳酸菌产生亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解
学科素养·强化训练
1．下表表示某培养基的配方，下列叙述正确的是( )
A.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基
B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
C．该培养基缺少提供生长因子的物质
D．该培养基调节合适的pH后就可以接种
解析：选B 从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基；微生物的营养物质主要包括氮源、碳源、水和无机盐等，培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨；生长因子主要包括维生素、氨基酸和碱基等，它们一般是酶和核酸的组成成分，蛋白胨可以提供生长因子；该培养基调节合适的pH后还需经灭菌后才可以接种使用。
2．[不定项选择](·山东模拟考)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正确的是( )
A．倒成平板后直接培养可判断有无污染
B．倒成平板后需要进行灭菌处理
C．图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙
D．生长图形法还可用于某些菌种的筛选
解析：选AD 可通过培养空白培养基判断培养基是否污染，A正确；先灭菌再倒平板，B错误；图中菌落生活在乙、丙区域之间，说明需要乙和丙，C错误；不同菌种所需生长因子不同，可利用题干方法筛选，D正确。
3．取9个洁净培养皿，均分为三组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，各组分别加入等量的不同培养基，每个平板均用涂布法接种0.1mL大肠杆菌菌液，37℃培养36h后，统计菌落数(见表)，以下相关叙述正确的是( )
A.Ⅰ组和Ⅱ组说明维生素可以促进大肠杆菌生长
B．Ⅰ组和Ⅲ组说明大肠杆菌正常生长需要糖类物质
C．三组实验均使用了液体培养基，以方便菌落计数
D．三组实验所使用的培养基均需62℃、30min消毒
解析：选A 由表格分析可知：Ⅰ组和Ⅱ组说明维生素可以促进大肠杆菌生长；Ⅱ组和Ⅲ组作对照，自变量是葡萄糖的有无，说明大肠杆菌正常生长需要葡萄糖；由题意知：每个平板都含有琼脂，属于固体培养基；三组实验所使用的培养基均需高压蒸汽灭菌。
4．[多选]如图表示果酒和果醋制作过程中的物质变化过程，下列叙述正确的是( )
A．过程①和②都只能发生在缺氧条件下
B．过程①和③都发生在酵母细胞的线粒体中
C．过程③和④都需要氧气的参与
D．过程①～④所需的最适温度不相同
解析：选CD 据图分析可知：①是细胞呼吸的第一阶段；②是无氧呼吸的第二阶段；③是有氧呼吸的第二、三阶段；④是果醋制作中乙醇氧化为醋酸的阶段。过程①在有氧或无氧的条件下都可以进行；过程①是在细胞质基质中进行的；③和④过程都必须在有氧的条件下才可以进行；①②(③)是果酒制作的阶段，其适宜的温度为18～25℃，④是果醋制作的阶段，其适宜的温度为30～35℃。
5．下面是利用微生物制作果酒、果醋的流程示意图，请据图判断下列说法正确的是( )
A．制作果酒时，先去除烂子粒和枝梗，再用清水冲洗掉污物
B．榨汁前，榨汁机和发酵瓶都需要用体积分数为70%的盐酸消毒
C．A过程是酒精发酵，A过程结束后，只需要提高一定的环境温度就能产生果醋
D．导致发酵产物不同的重要因素是温度、时间、菌种等
解析：选D 制作果酒时，应该先用清水冲洗掉污物，再去除烂子粒和枝梗；榨汁机要清洗干净，并晾干，发酵瓶要清洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒；A过程是酒精发酵，A过程完成后，除了需要提高一定的温度，还要通入氧气，才能产生果醋；根据流程图可知导致发酵产物不同的重要因素是温度、时间、菌种等。
6．(·全国卷Ⅲ)回答下列与细菌培养相关的问题。
(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是________________________________________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长，原因是____________________。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板________(填“倒置”或“正置”)。
(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是________________________________________。
(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
解析：(1)蛋白胨中含有碳元素和氮元素，可为细菌生长提供碳源和氮源，葡萄糖不能提供氮源，NaNO3不能提供碳源。不同细菌生长繁殖所需要的最适pH不同，制备培养基时要根据所培养细菌种类的不同来调节pH。硝化细菌是自养生物，可通过化能合成作用利用空气中的CO2合成有机物，所以在没有碳源的培养基上也能生长。
(2)用平板培养细菌时，一般将平板倒置，防止皿盖上的水滴滴到培养基中造成污染。
(3)在一定的培养条件下，不同微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此研究人员可根据菌落的这些特征初步区分微生物的种类。
(4)消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物，灭菌可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。因此，使用后的培养基在丢弃前要进行灭菌处理，防止其中的微生物污染环境。
答案：(1)蛋白胨 不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同 能够 硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源 (2)倒置 (3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征 (4)灭菌
7．(·凉山州模拟)反刍动物的瘤胃中有许多能利用尿素的微生物。为了研究利用尿素配制的反刍动物饲料，以替代部分蛋白质饲料，降低饲料成本，进行了相关实验。请回答下列问题：
(1)瘤胃中的尿素分解菌能将尿素分解成____________，其中的________可用于合成微生物蛋白，该蛋白质是反刍动物的优质氮源。
(2)为研究瘤胃中尿素分解菌的种类，实验者配制以尿素为唯一氮源的培养基，该培养基从功能上属于________培养基。可在培养基中加入________指示剂以初步鉴定这些菌能够分解尿素，为确定这些菌是尿素分解菌，可通过酶活性测定及基因数据库比对，只有具有脲酶活性和________基因的菌，才是真正的尿素分解菌。
(3)研究发现，如果只饲喂尿素配制的饲料，会导致反刍动物氨中毒，请根据高中所学知识分析其原因是____________________________。
(4)研究发现，瘤胃中尿素分解菌分解尿素的速度非常快，导致释放的物质没有被反刍动物充分利用就被排出，使尿素利用率偏低。如果你是研究者，希望通过哪些措施以减缓尿素分解，提高利用率？__________________________________________________
________________________________________________________________________。(答出两点)
解析：(1)瘤胃中的尿素分解菌能将尿素分解成CO2和NH3，其中的NH3可用于合成微生物蛋白，该蛋白质是反刍动物的优质氮源。
(2)为硏究瘤胃中尿素分解菌的种类，实验者配制以尿素为唯一氮源的培养基，该培养基从功能上属于选择培养基。可在培养基中加入酚红指示剂以初步鉴定这些菌能够分解尿素，为确定这些菌是尿素分解菌，可通过酶活性测定及基因数据库比对，只有具有脲酶活性和脲酶基因的菌，才是真正的尿素分解菌。
(3)如果只饲喂尿素配制的饲料，会导致反刍动物氨中毒，原因是氨会使瘤胃液pH值增大。
(4)瘤胃中尿素分解菌分解尿素的速度非常快，导致释放的物质没有被反刍动物充分利用就被排出，使尿素利用率偏低，要减缓尿素分解，提高利用率，可以减少尿素分解菌数量、降低脲酶的活性。
答案：(1)CO2和NH3 NH3 (2)选择 酚红 脲酶
(3)氨会使瘤胃液pH值增大 (4)减少尿素分解菌的数量、降低脲酶的活性
高考模拟·课下达标(十二)
一、选择题（每小题给出的四个选项中，只有一个选项是最符合题目要求的）
1．(·青羊区校级月考)关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( )
A．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯溶解
B．可用手触摸来确定培养基是否冷却至50℃左右，再进行倒平板
C．待平板冷却凝固5～10分钟后将平板倒过来放置
D．该培养基可用于培养细菌，但需将pH调至酸性
解析：选D 称量时牛肉膏易粘附在称量纸上，应将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯溶解，A正确；用手触摸锥形瓶，当锥形瓶刚刚不烫手时，培养基约为50℃左右，此时倒平板可防止培养基凝固，B正确；待平板冷却凝固5～10分钟后将平板倒过来放置，以防止培养皿盖凝结的水珠滴落，污染培养基，C正确；培养细菌的培养基应将pH调至近中性，D错误。
2．(·莲都区校级月考)下列关于无菌操作的叙述正确的是( )
A．制作棉塞的棉花可以选择用脱脂棉
B．配制培养基时，需在酒精灯火焰旁操作
C．G6玻璃砂漏斗使用后需用1mol/L的HCl浸泡
D．利用高压蒸气灭菌法对含有葡萄糖的培养基灭菌时，需将压强调整为g/cm2，其他条件不变
解析：选C 用脱脂棉做的棉塞时会吸收大量水分，而且不容易烘干，潮湿的脱脂棉容易被杂菌污染，同时透气性能也没有普通棉花好，因此制作棉塞的棉花应该选择用普通棉塞，A错误；配制培养基时，不需在酒精灯火焰旁操作，接种时需要在酒精灯火焰旁操作，B错误；G6玻璃砂漏斗使用后需用1mol/L的HCl浸泡，C正确；利用高压蒸气灭菌法对含有葡萄糖的培养基灭菌时，需将压强调整为1kg/cm2，其他条件不变，D错误。
3．酿酒厂常用酸性脲酶去除酒精类饮品中的尿素，以改善酒精类饮品的品质。下列叙述正确的是( )
A．从土壤中筛选酸性脲酶生产菌，其培养基的主要成分有葡萄糖、尿素、琼脂等
B．对筛选得到的酸性脲酶生产菌进行计数可用平板划线法
C．用酚红指示剂鉴定，若指示剂变红，说明该细菌分解尿素的能力很强
D．每个稀释度至少涂布3个平板的目的是排除实验组中非测试因素对实验的影响
解析：选A 从土壤中筛选酸性脲酶生产菌，应配置以尿素为唯一氮源的固体培养基，即其培养基的主要成分有葡萄糖、尿素、琼脂等，A正确；平板划线法只能用于分离微生物，不能用于计数，B错误；用酚红指示剂鉴定，若指示剂变红，说明该细菌能分解尿素，但不能确定其分解尿素的能力很强，C错误；设置对照组(未接种的平板)可排除实验组中非测试因素对实验的影响，D错误。
4．(·遂宁期末)下列与分解尿素的细菌的分离与计数、分解纤维素的微生物的分离实验有关的叙述，错误的是( )
A．尿素是一种重要的农业氮肥，农作物不能直接吸收利用
B．分解尿素的细菌能合成脲酶将尿素分解为氨和CO2
C．纤维素酶包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，均能催化纤维素分解成葡萄糖
D．采用稀释涂布平板法进行活菌计数，其结果可能会偏小
解析：选C 尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氨和CO2后才能被农作物利用，A正确；分解尿素的细菌能合成脲酶将尿素分解为氨和CO2，被农作物利用，B正确；纤维素酶包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，其中C1酶和CX酶能使纤维素分解成纤维二糖，葡萄糖苷酶能将纤维二糖分解成葡萄糖，C错误；采用稀释涂布平板法进行活菌计数，有的菌落有可能是由多个细菌形成的，所以其结果可能会偏小，D正确。
5．在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是( )
A．加入唯一氮源作为选择培养基，加入刚果红指示剂作为鉴别培养基
B．加入唯一氮源作为鉴别培养基，加入酚红指示剂作为选择培养基
C．加入酚红指示剂作为鉴别培养基，加入唯一氮源作为选择培养基
D．加入刚果红指示剂作为选择培养基，加入唯一碳源作为鉴别培养基
解析：选C 在分解尿素菌的分离和鉴定中，应该先加入尿素作为分解尿素菌的唯一氮源，让其合成脲酶，分解尿素，产生氨，氨呈碱性；然后加入酚红指示剂培养细菌，呈红色。
6．(·成都期末)下列与分离分解纤维素的微生物实验有关的说法，错误的是( )
A．鉴别培养基中的CMCNa能为纤维素分解菌提供碳源
B．纤维素分解菌的选择培养基只能以纤维素粉作为唯一碳源
C．两种刚果红染色法筛选出来的目的菌不一定都能分解纤维素
D．实验可以通过是否产生透明圈来筛选能分解纤维素的目的菌
解析：选B CMCNa是天然纤维素经化学改性后得到的纤维素衍生物，是纤维素的羧甲基醚化物，能为纤维素分解菌提供碳源，A正确；纤维素分解菌的选择培养基不一定选择纤维素粉作为唯一碳源，可以选择那些富含纤维素的物质，如滤纸等，B错误；两种刚果红染色法筛选出来的目的菌不一定都能分解纤维素，可能还会生长一些能利用纤维素分解的产物——葡萄糖的微生物，C正确；通过分析可知，实验可以通过是否产生透明圈来筛选能分解纤维素的目的菌，D正确。
7．下列关于泡菜制作过程中亚硝酸盐测定的说法正确的是( )
A．泡菜腌制过程中，亚硝酸盐含量先升高后降低
B．泡菜中乳酸菌的繁殖，使得亚硝酸盐含量骤增
C．泡菜腌制过程中的食盐用量应尽量少，以减少产亚硝酸盐菌的繁殖
D．比色法测定泡菜亚硝酸盐含量时，亚硝酸盐含量与OD值负相关
解析：选A 泡菜腌制过程中，亚硝酸盐含量先升高后降低，A正确；泡菜中乳酸菌的繁殖，使得亚硝酸盐含量先升高后降低，B错误；如果泡菜腌制过程中的食盐用量过少，泡菜会变质腐败，C错误；比色法测定泡菜亚硝酸盐含量时，亚硝酸盐含量与OD值正相关，D错误。
8．以下关于微生物发酵的说法正确的是( )
A．利用乳酸菌制作泡菜需先通气培养，后密封发酵
B．利用葡萄表面天然酵母制作葡萄酒通常不是单一菌种发酵
C．果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中情况相反
D．利用微生物发酵进行的食品加工往往需要严格灭菌
解析：选B 乳酸菌是严格厌氧的，所以应用乳酸菌制造酸奶时，开始就应密封，不能先通气，A错误；利用葡萄表面天然酵母制作葡萄酒通常不是单一菌种发酵，B正确；果醋制作过程醋酸菌在将酒精氧化为醋酸的过程中生成了水，稀释了酸溶液，使pH略有上升，之后随着醋酸增多，pH持续减小，在制作果酒的过程中，在不同时间内取发酵液样品，发现发酵液的pH一直下降，C错误；利用微生物发酵进行的食品加工往往不需要严格灭菌，防止杀灭发酵的菌种，D错误。
9．利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇。使用燃料乙醇减少了对石油资源的依赖，如图为生产燃料乙醇的简要流程，据图分析错误的一项是( )
A．要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样
B．图中②过程常用的微生物B是酵母菌
C．微生物A的新陈代谢类型既可以是异养需氧型也可以是异养厌氧型
D．微生物A和微生物B可利用的碳源相同
解析：选D 微生物A能降解纤维素，因此要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样，A正确；图中②过程可产生酒精，因此该过程常用的微生物B是酵母菌，B正确；微生物A的新陈代谢类型既可以是异养需氧型也可以是异养厌氧型，C正确；微生物A可用碳源包括纤维素，而微生物B不能利用纤维素，D错误。
二、选择题（每小题给出的四个选项中，有的只有一个选项正确，有的有多个选项正确）
10．下列关于刚果红染色法的说法中，不正确的是( )
A．倒平板时就加入刚果红，长期培养刚果红有可能被其他微生物分解形成透明圈
B．倒平板时就加入刚果红，可在培养皿中先加入1mLCR溶液后加入mL培养基
C．纤维素分解菌菌落周围出现刚果红
D．先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，不需用氯化钠溶液洗去浮色
解析：选BCD 倒平板时就加入刚果红，长期培养刚果红有可能被其他微生物分解形成透明圈，A正确；倒平板时就加入刚果红，可在培养皿中先加入10mg/mLCR溶液，灭菌后按照每mL培养基加入1mL的比例加入CR溶液，B错误；纤维素分解菌菌落周围出现透明圈，C错误；先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，需用氯化钠溶液洗去浮色，若在细菌菌落形成前倒平板时加入刚果红，则不需要用氯化钠溶液洗去浮色，D错误。
11．为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见表)下列叙述不正确的是( )
注：“＋”表示有，“－”表示无。
A．培养基甲可对纤维素分解菌进行分离和鉴别
B．纤维素分解菌可以在培养基甲中大量繁殖
C．培养基乙可用于分离鉴别纤维素分解菌，因为该培养基中有琼脂和CR溶液
D．用甲、乙培养基培养纤维素分解菌一段时间后，甲中可得到周围有透明圈的菌落
解析：选ACD 据表分析，培养基甲无琼脂，为液体培养基，不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基，A错误；培养基甲中有纤维素粉，因此纤维素分解菌可以在培养基甲中大量繁殖，B正确；培养基乙没有纤维素粉，但有淀粉碳源，纤维素分解菌和其他杂菌都能生存，因此也不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，C错误；甲培养基为液体培养基，培养纤维素分解菌一段时间后，不能得到周围有透明圈的菌落，因为只有固体培养基上存在菌落，D错误。
12．利用不同微生物发酵制作食品的历史悠久，遍布民间，以下关于微生物发酵的说法不正确的是( )
A．利用乳酸菌制作泡菜需经常拧松放气
B．酵母菌在酒精发酵过程中只产生乙醇和二氧化碳，而葡萄酒的口味与所用原料有关
C．酒精可作为醋酸菌的碳源和能源
D．腐乳发酵后期密封处理有利于毛霉繁殖
解析：选ABD 乳酸菌无氧呼吸不会产生二氧化碳，制作泡菜过程中不需要经常拧松放气，A错误；酵母菌在酒精发酵过程中会产生乙醇、二氧化碳和其他中间产物，B错误；在没有糖原的情况下，醋酸菌可以把酒精转化为醋酸，即酒精可作为醋酸菌的碳源和能源，C正确；腐乳发酵后期，加盐、加卤汤、密封处理等可抑制微生物生长，不利于毛霉繁殖，D错误。
三、非选择题
13．(·贵州模拟)杨梅果实风味独特酸甜适中，具有很高的营养和保健价值。如图是制作杨梅酒和杨梅醋的流程图。请回答下列问题：
(1)传统发酵中，发酵液虽然未经过严格的灭菌处理，但杂菌却不能正常生长繁殖，这是由于果酒发酵的____________条件抑制了杂菌的生长。用来检验酒精的化学试剂是________________。
(2)果酒制作过程中，酵母菌无氧呼吸产生酒精的场所是____________，该阶段应该将温度控制为________；温度适宜时果酒发酵时间较短，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)杨梅醋的发酵过程中，除去必需的营养物质外，还需要向发酵液中持续地通入________________________________________________________________________。
(4)下图表示果酒发酵过程中，发酵液的糖度(葡萄糖的浓度)和酒精度(酒精浓度)随时间变化的关系。发酵前24h，酒精度上升很慢，其原因是____________________________________。96h后酒精度和糖度的变化都趋于平缓，其原因是____________________________________________。
解析：(1)传统发酵中，发酵液虽然未经过严格的灭菌处理，但杂菌却不能正常生长繁殖，这是由于果酒发酵的缺氧、酸性条件抑制了杂菌的生长。酒精可用酸性重铬酸钾溶液检测。
(2)酵母菌无氧呼吸的场所是细胞质基质；果酒发酵的适宜温度是18～25℃；温度适宜时果酒发酵时间较短，原因是该温度下与果酒发酵相关的酶活性最高，发酵速度快。
(3)参与果醋制作的醋酸菌是嗜氧菌，因此杨梅醋的发酵过程中，除去必需的营养物质外，还需要往发酵液中持续地通入无菌氧气(或无菌空气)。
(4)发酵前24h，酒精度上升很慢，其原因是此阶段酵母菌主要进行有氧呼吸，大量增殖。96h后酒精度和糖度的变化都趋于平缓，其原因是高浓度的酒精和代谢废物会抑制酵母菌的代谢而影响发酵。
答案：(1)缺氧、酸性 酸性重铬酸钾
(2)细胞质基质 18～25℃ 此时与果酒发酵相关的酶活性最高，发酵速度快
(3)无菌氧气(或无菌空气)
(4)此阶段酵母菌主要进行有氧呼吸，大量增殖 高浓度的酒精和代谢废物会抑制酵母菌的代谢而影响发酵
14．(·淄博一模)饮料酒在生产过程中会产生少量尿素，酒体呈酸性。尿素能与酒精反应生成有害物质，脲酶能分解酒体中的尿素。请回答下列问题：
(1)对土壤溶液中酸性脲酶菌进行富集培养(初筛)时，培养基的氮源应选用________，与固体培养基相比，液体培养基更适于富集培养的原因是_________________________。
(2)复筛酸性脲酶菌的培养基为中性固体培养基，以酚红为指示剂。经接种、培养后，发现平板上有的菌落周围出现红色圈，有的没有。在挑选时，应选择______________(填“有红色圈的菌落”或“无红色圈的菌落”)。
(3)从酸性脲酶菌中提取脲酶后，不宜直接将脲酶加入酒体中，原因是______________________________________________________。将酸性脲酶和海藻酸钠混合，用注射器滴入凝结液中形成珠粒，这种固定化酶的方法称为________。研究发现海藻酸钠浓度过高时脲酶的活性偏低，原因是______________________。
(4)工业化处理酒体中尿素时，若酒体在一次流经酸性脲酶凝胶反应柱后，尿素含量仍高于产品标准，在不增加柱高的前提下，改进生产工艺流程的措施是__________________。
解析：(1)脲酶菌能合成脲酶，脲酶能分解尿素，因此对土壤溶液中酸性脲酶菌进行富集培养(初筛)时，培养基的氮源应选用尿素；与固体培养基相比，液体培养基更适于富集培养的原因是培养基与菌体接触充分，菌体繁殖快。
(2)复筛酸性脲酶菌的培养基为中性固体培养基，以酚红为指示剂。经接种、培养后，发现平板上有的菌落周围出现红色圈，有的没有。在挑选时，应选择无红色圈的菌落。
(3)从酸性脲酶菌中提取脲酶后，不宜直接将脲酶加入酒体中，原因是酒体中的酶难以回收，不能再次利用；酶混合在酒体中，影响产品质量。将酸性脲酶和海藻酸钠混合，用注射器滴入凝结液中形成珠粒，这种固定化酶的方法称为包埋法。海藻酸钠浓度过高时脲酶的活性偏低，原因是反应底物和产物不易扩散。
(4)工业化处理酒体中尿素时，若酒体在一次流经酸性脲酶凝胶反应柱后，尿素含量仍高于产品标准，在不增加柱高的前提下，改进生产工艺流程的措施是减慢流速、多次流入。
答案：(1)尿素 培养基与菌体接触充分，菌体繁殖快
(2)无红色圈的菌落
(3)酒体中的酶难以回收，不能再次利用；酶混合在酒体中，影响产品质量 包埋法 反应底物和产物不易扩散
(4)减慢流速、多次流入
15．γ氨基丁酸(GABA)是具有降血压、抗焦虑等功能的水溶性氨基酸。科研人员通过实验研究了白方腐乳在前发酵、盐腌和后发酵过程中GABA的含量变化，为寻找生产富含GABA腐乳的工艺奠定基础。实验步骤如下：
①豆腐白坯表面接种毛霉孢子后，在适宜的温度和湿度下培养48h，获得毛坯。②将毛坯分层整齐地摆放在瓶中，盐腌5天。③腌制后加入卤汤，置于28℃恒温箱中后发酵90天。④分别采集各时段的腐乳坯样品，测定GABA含量，结果如下图。请分析并回答问题：
(1)通常含水量为______左右的豆腐适合制作腐乳；毛霉生长的适宜温度为________℃。
(2)前发酵过程中，毛坯的GABA含量发生明显变化的原因是毛霉产生的________促进蛋白质水解产生GABA。
(3)步骤②中，加盐腌制的正确操作是_______________________________________。此过程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面与食盐抑制毛霉生长、酶活性降低有关；另一方面，豆腐中的水分渗出，部分GABA会__________而导致测定值减小。
(4)后发酵所加的卤汤中，具有抑菌防腐和调味的成分主要有________________。此过程中，GABA含量再次增加的主要原因是________继续发挥作用，后发酵______天后的白方腐乳出厂销售比较适宜。
解析：(1)制作腐乳所用豆腐的含水量为70%左右，水分过多则腐乳不易成形；毛霉生长的适宜温度为15～18℃。
(2)据图中曲线可知，前发酵过程中，毛坯的GABA含量明显升高，原因是毛霉产生的蛋白酶促进蛋白质水解产生GABA。
(3)加盐的具体操作为：逐层加盐，随着层数的加高增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些，因为越接近瓶口被杂菌污染的机会越大；此过程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面与食盐抑制毛霉生长，酶活性降低有关；另一方面，豆腐中的水分渗出，部分GABA会随水流失而导致测定值减小。
(4)后发酵所加的卤汤中，具有抑菌防腐和调味的成分主要有香辛料和料酒。后发酵过程中，GABA含量再次增加的原因是毛霉产生的蛋白酶继续发挥作用，由曲线图可知，后发酵60d后的白方腐乳出厂销售比较适宜。
答案：(1)70% 15～18
(2)蛋白酶
(3)逐层加盐，随着层数的加高增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些 随水流失
(4)香辛料和料酒 蛋白酶 60
16．(·揭阳一模)科研人员发现，在富营养化水体中，硝化细菌和反硝化细菌的数量较正常水体多，且硝化细菌主要分布于水体表层，反硝化细菌主要分布于水体中层、底层。
(1)现准备在实验室分别大量培养这两种微生物，从物理性质角度分析，应选择______培养基，并将pH调至________________，在保证营养充足的状态下，还需为硝化细菌创设________(填“有氧”或“无氧”)环境，为反硝化细菌创设________(填“有氧”或“无氧”)环境。
第一步：取富营养化水体，灭菌后等分为三组；
第二步：A组加入适量的硝化细菌，B组加入等量的反硝化细菌，C组加入等量的两菌混合物；
第三步：在适宜的条件下培养一段时间后，结果如表：
①富营养化水的灭菌方式是________________，进行灭菌的原因是________________________________________________________________________。
②为了使测量结果更准确，需另设一实验对照组，其设置为________________________________________________________________________。
解析：(1)扩大培养微生物应该用液体培养基；硝化细菌主要分布于水体表层，反硝化细菌主要分布于水体中层、底层，由此可知在保证营养充足的状态下，还需为硝化细菌创设有氧环境，为反硝化细菌创设无氧环境。
(2)①对培养基进行灭菌应该用高压蒸汽灭菌法；进行灭菌的目的是防止水体中原有微生物对实验结果的干扰。
②为了使测量结果更准确，需另设一实验对照组，即取与实验组等量的灭菌后的富营养水，但不接种。
答案：(1)液体 中性或微碱性 有氧 无氧
(2)①高压蒸汽灭菌法 防止水体中原有微生物对实验结果的干扰
②取与实验组等量的灭菌后的富营养水，但不接种
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