本文系统研究了苹果酒有机酸的高效液相色谱仪分析法，对色谱柱的型号、流动相的配比、流速、检测波长等色谱条件进行了优化。
1、实验材料
实验室自制的苹果酒样品；L苹果酸(色谱纯)；L一乳酸(色谱纯)；L一苹果酸(分析纯)；甲醇(色谱纯)；甲酸(色谱纯)。
2、实验仪器
分析天平0.1mg；
漩涡混合器；
数控超声波清洗器；
循环式多用真空泵；
高效液相色谱仪，配紫外检测器；
pH计。
3、样品预处理
将苹果酒样品在室温静置平衡后，先经滤纸过滤，再经0.45um微孔滤膜过滤，稀释3.3倍，直接进样。
4、仪器及其条件
色谱柱：C18(3.5umX4.6mm×75mm)；
柱温：25℃；
流动相：0.1%甲酸+3%甲醇，使用前经过0.45um混合纤维树脂膜抽真空过滤；
流速：0.5mL／min；
进样量：20ul；
检测波长：nm。
有机酸定性：将苹果酒提取液色谱图与苹果酸、乳酸标准品色谱图进行对照，根据保留时间初步确定苹果酒中有机酸种类，同时用加样外标法和光谱图数据进行辅助定性
有机酸定量：配制L一苹果酸和L一乳酸的混合标液作为母液，依次稀释得到6个浓度(苹果酸、、、、和mg／L；乳酸、1、、、和mg／L)。
各浓度梯度的混合标样按照高效液相色谱仪分析条件进行实验，每个水平点重复进样3次，以峰面积(Y)对质量浓度(X，mg／L)作图，绘制出标准曲线。
5、色谱柱的选择
在苹果酒的有机酸高效液相色谱仪检测中，重要的是优选有机酸的色谱分离条件，这些条件涉及色谱柱型号、流动相配比、流速、检测波长等。
液相色谱柱是液相色谱的分离系统，在混合物中各组分准确定性定量方面起着重要的作用，为了使苹果酒在高效液相色谱仪上有良好的分离效果，首先对使用的色谱柱进行了优选。
本实验选用了3种型号的柱子，即
①C18柱，5um×4.6mm×mm；
②T3柱，5um×4.6mm×mm；
③C18柱，3.5um×4.6mm×75mm。
以苹果酸一乳酸混合标样及自制苹果酒为样品考察了3种柱子的分离效果，在相同的洗脱程序下进行测试，得到的色谱图，在相同的分析时间下T3柱具有更好的分离效果；而考虑分离效果近似的情况下，C18柱能在最短的时间内将苹果酸和乳酸有效分离，只需12min即可分析一个样品。这是由于所的C18柱(3.5um×4.6mm×75mm)是一种快速分离色谱柱，该柱颗粒粒径比普通柱要小，为3.5um。快速分离柱高效液相色谱仪与传统高效液相色谱仪相比，具有分离时问短，分析速度快，流动相消耗小，分析成本低等优点。为高效地完成测试工作，本研究在各峰分离效果较好的前提条件下，尽可能让所需的分离时间缩短，因此我们最终选择了C18(3.5um×4.6mm×75mm)柱作为实验用分析柱
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